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Super-Bradford蛋白定量試劑盒說明書
更新時間:2020-10-15 點(diǎn)擊量:1668

  

     Super-Bradford蛋白定量試劑盒說明書

 

Super-BradfordProteinAssayKit                                                       

Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書

 



Cat.No. K0013                         

 

保存:2-8℃

 

組分說明



 

Catalogno.                                 K0013

KitSize                                800 次/微孔,100 次/試管

BradfordProteinAssayReagent               200ml

BSA 標(biāo)準(zhǔn)液(2mg/ml)                          2ml

 



 

產(chǎn)品簡介

 

    Bradford 法是簡單和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍(lán) G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合后,產(chǎn)生藍(lán)色化合物,反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在 465-595nm 處有大的光吸收值,化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系,因此可通過檢測 595nm 的光吸收值的大小來計(jì)算蛋白的含量。本產(chǎn)品將傳統(tǒng)的 Bradford 方法進(jìn)行了改良,大限度的加大蛋白定量的線性范圍,變異性小于普通考馬斯亮藍(lán)染色法,靈敏度范圍為 100-1,500 μg/ml。使用本產(chǎn)品反應(yīng)迅速,顏色產(chǎn)物 1 小時內(nèi)保持穩(wěn)定。本試劑盒適用于多種緩沖液系統(tǒng),不受金屬離子、還原劑和螯合劑的干擾。

 

注意事項(xiàng) 

 

 1.  如待測樣品中含較多的干擾物質(zhì)(具體見附表 1),可采用 BCA 蛋白定量試劑盒(K0014)或其他蛋白定量產(chǎn)品。

 

 2.  BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進(jìn)行稀釋)。

 

 3.  本試劑盒不適合含有去污劑的蛋白定量,所測蛋白分子量必須大于 3kD。

 

 4.  操作中請佩戴手套。

 

 5.  本產(chǎn)品僅限科研使用。

 



操作步驟(以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)為例)

 

 1.  稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。

 

 

                                                

管號    稀釋液用量(μl)   BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量(μl)    BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度(μg/ml)

                                                 

 

A                 0                 100                2,000

B                50                 150                1,500

 

C                200                200                1,000

 

D                200         200(從C管中?。?         500

E                200         200(從D管中?。?         250

 

F                200         200(從E管中?。?          125

G                200                 0                 0(空白)

 

 

 2.  試管檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)

 

    1)按上表稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,將 30 μl 稀釋好的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品分別加到作好標(biāo)記的試管中。 

    2)取干凈的試管,分別加入 30 μl 待測蛋白樣品(原液或稀釋液),并作好標(biāo)記,推薦每個測定做 2-3 個平行反應(yīng)。

 

    3)向步驟 1)和步驟 2)的試管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,室溫放置 10 分鐘。

 

    4)用分光光度計(jì)測定 595nm 處的吸光值。

 

    5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

 

        注意:數(shù)據(jù)處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線,可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。

 

    6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi),請重新稀釋樣品后再次測定。

 

 3.  微孔檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)

 

    1)將按表 1 稀釋好的 A-GBSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各 5 μl 分別加到作好標(biāo)記的 96 孔板微孔中。 

 

    2)每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,蓋上 96 孔板蓋,室溫放置 10 分鐘。

 

    4)用酶標(biāo)儀測定 595nm 處的吸光值。

 

    5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

 

        注意:數(shù)據(jù)處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線,可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。

 

    6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi),請重新稀釋樣品后再次測定。

 

  

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測

CCK8檢測

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

蛋白雙向(2-D)

動物實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh)

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動物實(shí)驗(yàn)

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測

動物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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