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雞肉、豬肉、蜂蜜中四環(huán)素殘留檢測(cè)試劑盒
更新時(shí)間:2022-11-01 點(diǎn)擊量:851

四環(huán)素

快速檢測(cè)試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物四環(huán)素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗四環(huán)素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物四環(huán)素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物四環(huán)素的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度:  0.05ppb

孵育溫度:      25

孵育時(shí)間:      30min15min

樣本檢測(cè)下限

雞肉樣本:

四環(huán)素 ···········································  0.4ppb

二甲胺四環(huán)素 ··································  0.4ppb

吡四環(huán)素 ········································  0.4ppb

金霉素   ········································  0.4ppb

脫甲基金霉素 ·································  1.2ppb

土霉素 ··········································  0.8ppb

強(qiáng)力霉素 ·······································   1ppb

豬肉、蜂蜜樣本:

四環(huán)素 ··········································  0.5ppb

二甲胺四環(huán)素 ·································  0.5ppb

吡四環(huán)素 ······································   0.5ppb

金霉素 ·········································   0.5ppb

脫甲基金霉素 ································   1.5ppb

土霉素 ···········································   1ppb

強(qiáng)力霉素 ········································  1.2ppb

交叉反應(yīng)率

四環(huán)素 ··········································  100%

二甲胺四環(huán)素 ·································  125%

吡四環(huán)素  ·······································   110%

金霉素  ···········································  100%

脫甲基金霉素 ···································   35%

土霉素  ············································  58%

強(qiáng)力霉素  ·········································  45%

樣本回收率

、豬肉、蜂蜜 ····························  85±20%

三、試劑盒組成

1

微量測(cè)試孔

每條8孔,一板12


2

標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液(81ppb

1ml

色帽


3

高濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ppb

1ml

色帽


4

酶標(biāo)記物

7ml

白色帽

5

抗體工作液

7ml

白色

6

底物A

7ml

白色帽

7

底物B

7ml

黑色帽

8

終止液

7ml

黃色帽

9

20X濃縮洗滌液

15ml

白色帽

10

10X樣本提取液

50ml*2

透明帽

11

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液

15ml*2

藍(lán)色帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱

微量移液器:?jiǎn)蔚?/span> 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

      劑:甲醇

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理需配制:

配液1  樣本提取A

去離子水450ml50ml 10X樣本提取液混勻或按91的比例按需配制(10X樣本提取液有結(jié)晶,需溶解后在進(jìn)行稀釋。                                      

配液2  樣本提取B

取甲醇50ml450ml樣本提取液A混勻或按19的比例按需配制。

配液3  樣本提取C

取甲醇100ml270ml樣本提取液A混勻或按1027的比例按需配制。

樣本處理:

a雞肉處理方法

1、 稱取1±0.05g均質(zhì)后的樣本于50ml離心管中,加入8ml樣本提取液A(見配液1,振蕩3min,室溫4000r/min以上,離心10min; 

2、 50上清液用于分析

樣本稀釋倍數(shù): 8                         

b豬肉處理方法

1、稱取1±0.05g均質(zhì)后的樣本于50ml離心管中,加入10ml樣本提取液B(見配液2,振蕩3min,室溫4000r/min以上,離心10min; 

250 µl上清液用于分析

樣本稀釋倍數(shù): 10                   

c蜂蜜處理方法

1、 稱取1±0.05g質(zhì)后的樣本于50ml離心管中,加入10ml樣本提取液C(見配液3,振蕩3min,室溫4000r/min以上,離心10min; 

2、 50 µl上清液用于分析

樣本稀釋倍數(shù): 10                        六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

測(cè)定前應(yīng)須知:

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。

2、 使用之后立即將所有試劑放回28。

3、 ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。

4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

1、 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 配制標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)650µl標(biāo)準(zhǔn)濃縮液81ppb950µl標(biāo)準(zhǔn)復(fù)溶液稀釋    4.05ppb

標(biāo)準(zhǔn)5600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品6混合                1.35ppb

標(biāo)準(zhǔn)4600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品5混合                0.45ppb

標(biāo)準(zhǔn)3600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品4混合                0.15ppb

標(biāo)準(zhǔn)2600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品3混合                0.05ppb

標(biāo)準(zhǔn)1標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液         0ppb                                         

3、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8。

4、 配液:將15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照119稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

5、 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加加入酶標(biāo)記物50µl/再加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。25環(huán)境中反應(yīng)30min。

7、 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

8、 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min。

9、 測(cè)定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),5min內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含四環(huán)素量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.243; 0.05ppb1.8160.15ppb1.415;0.45ppb0.74;1.35ppb0.313;4.05ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb4.05ppb;樣本2的濃度范圍是0.15ppb0.45ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實(shí)際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品濃ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索取)

八、 注意事項(xiàng)

1、 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

1、 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8保存,不要冷凍。

2、  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

 

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