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NCI-H520人肺鱗癌細(xì)胞傳代復(fù)蘇技巧
更新時間:2023-02-23 點(diǎn)擊量:1009

NCI-H520人肺鱗癌細(xì)胞

Human Lung Squamous Cell Carcinoma ,H520

貨號:YJ-h238STR鑒定)

價格: 1800.0

規(guī)格: 1*10 6              

細(xì)胞介紹

NCI-H520細(xì)胞是由Gazdar AF等在1982年建系而來,源于鱗狀細(xì)胞肺癌組織;NCI-H520細(xì)胞p53 mRNA表達(dá)水平較正常肺組織低,但是沒有大的結(jié)構(gòu)DNA的異常。NCI-H520細(xì)胞角蛋白、波形蛋白陽性,神經(jīng)絲三聯(lián)蛋白陰性;NCI-H520細(xì)胞在軟瓊脂中可形成克隆。

細(xì)胞特性

1 來源:人 肺癌組織

2 形態(tài):貼壁,上皮細(xì)胞樣,多角形,緊密排列

3 含量:>1x10 細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用。

NCI-H520人肺鱗癌細(xì)胞.png


對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

 

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