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馬外周血單核細胞分離液試劑盒

馬外周血單核細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號: HY2011H

所屬分類:分離液試劑盒

產(chǎn)品時間:2024-08-28

簡要描述:Store at: RT° C Size :2X100ml
馬外周血單核細胞分離液試劑盒

試劑:全血及組織稀釋液 100ml
試劑:細胞洗滌液 100ml
試劑A: 100ml
試劑D: 100ml
說明書 1份

詳細說明:

馬外周血單核細胞分離液試劑盒

Store at:::RT 試劑盒規(guī)格:::2×100ml/Kit

馬外周血單核細胞試劑盒內(nèi)容:

全血及組織稀釋液 100ml

細胞洗滌液 100ml

試劑 A 100ml

試劑 D 100ml

說明書 1

本系列產(chǎn)品目錄

1. 適用于各種動物血液及臟器組織本系列產(chǎn)品檢索

2. 相關(guān)試劑及耗材

3. 注意事項

4. 應(yīng)用

5. 產(chǎn)品性能指標

6. 貯藏及保存期限

7. 實驗前準備

8. 各種動物單核細胞分離液試劑盒使用方法說明及圖例

9. HES-TBD550 使用說明

10. 組織單細胞懸液的制備

11. 生產(chǎn)企業(yè)

1. 適用于各種動物血液及臟器組織本系列產(chǎn)品檢索:::

馬外周血單核細胞2. 注意事項

A 本分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過程中應(yīng)在 18-25避光保存,啟封后置 4

℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于 10 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,

影響分離效果。

B 待分離的血液、組織及細胞要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一

定在20水浴箱中復(fù)溫20分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2時分離效果,

且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。

C 由于各品牌離心機的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響

分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時間,摸索*的分離條件(具體分離條件

各實驗室自定)。

D 使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

E *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑

體積。

F 分離過程中所用其他試劑如:羥乙已基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及紅細

胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇,本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無菌、無病毒、無支原體、低內(nèi)

毒素水平且無細胞毒性,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。

4. 應(yīng).

適用于從動物血液或臟器組織中分離單核細胞。

5.. . . 產(chǎn)品性能指標

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

內(nèi)毒素 0.5...EU/ml

無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下,,,

25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

6. 貯藏及保存期限 6. 貯藏及保存期限

18-25避光保存,有效期兩年。啟封后置 4保存,有效期一周。

注:若保證無微生物污染,啟封后可置 4長期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時本分離液易

出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

7. 實驗前準備 7. 實驗前準備

A 試劑

單核細胞分離液試劑盒所含試劑、組織勻漿液、羥乙已基淀粉 550、胎牛血清

B 器材

玻璃離心管、玻璃滴管

水平轉(zhuǎn)子離心機、無菌工作臺

8. 各種動物 8. 各種動物單核細胞分離液試劑盒使用方法說明及圖例

A. 10ml 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 A、D 兩種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);

B 1ml新鮮抗凝血按11比例與全血及組織稀釋液混勻并小心疊加于D液之液面上;或?qū)⒔M織單細胞懸液(細胞濃度為2×108

-1×109/ml,制備方法詳見“10.組織單細胞懸液的制備方法”)疊加于D液之液面上;

C. 400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子);

此時離心管中由上至下細胞分為六層。*層;為血漿(稀釋液)層。第二層;;;為;單核

細胞層。。。第三層;為透明 D 液層。第四層;為淋巴細胞層。第五層;為透明 A 液層。第六層;

為極少量紅細胞層。收集第二層單核細胞放入含 4-5ml 細胞洗滌液的試管中,充分混勻后,

500g(約 1800 轉(zhuǎn)/分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復(fù)洗滌 2 次即得所需單核細胞。

注::A. 提取率約為 80%。

 B. 分離大量樣品時,具體操作方法請參照我公司“淋巴細胞快速分離技巧”,查詢路徑:

登陸我公司,在產(chǎn)品搜索中輸入您要的產(chǎn)品名稱→點擊查詢→或者直接我的客服!

 血液(人)中各細胞含量參考值 中各細胞含量參考值:::

男:4.0-5.5×1012/L(400-550 萬個/mm3

)

女:3.5-5.0×1012/L(350-500 萬個/mm3 紅細胞 )

新生兒:6.0-7.0×1012/L(600-700 萬個/mm3

)

成人:4.0-10.0×109

/L(4000-10000 /mm3

) 白細胞 新生兒:15.0-20.0×109

/L15000-20000 /mm3

)

血小板 100-300×109

/L10 -30 萬個/mm3

)

名稱 占白細胞總數(shù)百分比 占白細胞總數(shù)百分比

嗜中性粒細胞 30%-70%

嗜酸性粒細胞 0.5%-5%

嗜堿性粒細胞 0%-1%

淋巴細胞 20%-40%

白細胞分類計數(shù)

單核細胞 3%-8% www.tbdscience.com

9. HES- 9. HES-TBD550 使用說明

HES 是從支鏈淀粉衍生出來的,是富含淀粉的復(fù)合物,其生理和化學(xué)特性主要由羥乙已基

取代度即取代級、平均分子量決定。大量實驗表明平均分子量越大對紅細胞的凝集作用越強,

有效提高紅細胞的沉降速度,從而使紅細胞與其它細胞分離。故而,使用 HES-TBD550(羥

乙已基淀粉 550)沉淀法是一種高效的細胞分離方法。

間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells ,MSCs) 是指一群可向成骨細胞、成脂肪細胞、

骨髓基質(zhì)細胞、肝臟細胞、心肌細胞和神經(jīng)細胞等多種細胞分化的多潛能組織干細胞,是在

細胞治療、基因治療中有效發(fā)揮作用的理想工程細胞。MSCs 不僅存在于骨髓,也可從臍血、

外周血中以及脂肪組織、肌肉、胎兒器官、大腦、牙齒中分離。UCB - MSCs 的分離、篩選、

增殖、分化與臍血樣本的選擇、培養(yǎng)基的差異以及分離、擴增分化過程中操作技術(shù)等多種因

素有關(guān)。目前用于 UCB - MSCs 分離的方法有:貼壁篩選法、密度梯度離心法、流式細胞儀

法和免疫磁珠法。流式細胞儀法對細胞損傷較大,免疫磁珠法價格相對較貴且由于抗原抗體

反應(yīng)也容易改變細胞原有特性,而 HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法常與貼壁篩選法結(jié)合使用,可提高所得 UCB - MSCs 的純度,目前研究多采用此法。國內(nèi)不少學(xué)者采用羥乙已基淀粉沉淀紅細胞,然后再進行離心分離單個核細胞,也取得不錯結(jié)果。實驗

證明采用隨機數(shù)字表法,將每份臍血隨機分入兩個不同處理組,從而將臍血樣本的個體差異

減小到zui小程度。結(jié)果證實,HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法獲得的有核細胞數(shù)量明顯多于 FICOLL 密度梯度離心法。本實驗采用的羥乙已基淀粉商品名為

HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550),克分子滲透壓為 308mosmL,膠體滲透壓為 6836 mmHg,

可影響紅細胞集聚性沉降率。紅細胞集聚是可遞性橋接結(jié)構(gòu)形成的結(jié)果,由大的 HES-TBD550

(羥乙已基淀粉 550)分子處在紅細胞之間聯(lián)接而成。HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550)同時還

阻礙白細胞和內(nèi)皮細胞的黏附,并使平均血小板容積呈現(xiàn)微弱地降低,從而有輕度抑制血小

板集聚的功能。臍血經(jīng) HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550)處理后,可使紅細胞沉積至試管底,

對其它主要成分包括干細胞無影響。經(jīng)這樣處理后,實驗時間相對較短(平均為 1.5 h),

步驟相對較少,細胞污染幾率小,從而使細胞數(shù)損失減少。結(jié)論證明,與相應(yīng)的干細胞分離

液聯(lián)合分離使用羥乙已基淀粉沉淀法是一種高效的臍血干細胞分離方法。

10. 組織單細胞懸液的制備 10. 組織單細胞懸液的制備

注::::A.. .. 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,,,酶消化法由于各實驗室選取的消化 ,酶消化法由于各實驗室選取的消化酶種類各不相同,,,請各實驗室自行選擇進行試驗 ,請各實驗室自行選擇進行試驗。。。

B. .. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 B. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境。。。 。

剪碎法:::將組織塊放入平皿后 ,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至

勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾到試管內(nèi);離心沉淀1500轉(zhuǎn)/分×3 min,再用細胞洗滌液清洗3次,每次以500rpm

短時低速離心除去細胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾去細胞團塊。作細胞計數(shù)并

調(diào)整細胞濃度為(25)×107/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血

清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108

-1×109/ml 的單細胞懸液備用。

勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內(nèi),加入 2ml 組織勻漿液及 20%

胎牛血清;緩慢轉(zhuǎn)動研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集

細胞懸液,經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細胞洗滌液

3 次,離心沉淀。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(25)×107/ml。常溫下放置, 待測

細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108

-1×109

/ml 的單細胞懸液備用。

細胞計數(shù)方法:

細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法。一般利用計數(shù)板(血球計數(shù)板)

進行。既可用于分離(散)細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,也可用于

對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù)。不論計數(shù)的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。

計數(shù)與計算過程

1)、在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,至

蓋玻片被液體充滿為止。

3)、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,

對于細胞團按單個細胞計數(shù)。

4)、按下式計數(shù)細胞懸液的密度:

細胞密度=(4 個大格細胞總數(shù)/4)×104/ml×稀釋倍數(shù)

公式中乘以 104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為:

1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3

  1ml1000mm3

細胞計數(shù)要點:::

A 進行細胞計數(shù)時,要求懸液中細胞數(shù)目不低于 104/ml,如果細胞數(shù)目很少要進行離

心再懸浮于少量培養(yǎng)液中;顯微鏡下計數(shù)時,遇到 2 個以上細胞組成的細胞團,應(yīng)按單個細

胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數(shù)<200 /10mm2>500 /10 mm2

時,說明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。

B 要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數(shù)準確性。

C 取樣計數(shù)前,應(yīng)充分混勻細胞懸液,尤其是多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混

勻,以求計數(shù)準確;

D 數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照一個細胞計算。如果細

胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計左線,不計右線。

E 操作時,注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數(shù)。

初學(xué)者易犯的錯誤:::

A 計數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。

B 滴入細胞懸液時蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。

C 滴入懸液時的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。

12. 參考文獻 12. 參考文獻

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中華器官移植雜志,2003,24:220-222. www.tbdscience.com

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所灝洋生物聯(lián)合實驗室監(jiān)制 本品只能用于科學(xué)研究,,,不能用于臨床檢測

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J.Stem Cells,2002,20(3):205.

5 Yu JC, Daniel TS, Ching PT, et al. Disparate mesenchyme-lineage tendencies

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deciduous teethJ. Proc Natl Acad Sci USA, 2003,100:58075812.

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10 孫海梅,季鳳清,李榮平,等.不同培養(yǎng)條件下人臍血間充質(zhì)干細胞的差異[J. ***

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12 鄭德先,吳克復(fù),褚建新.現(xiàn)代實驗血液學(xué)研究方法與技術(shù).北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和

醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1999.

13 鄂征.組織培養(yǎng).北京出版社,1995.

14 朱立平,陳學(xué)清.免疫學(xué)常用實驗方法.人民軍醫(yī)出版社,2000.

貨號                     品牌              產(chǎn)品名稱             規(guī)格      報價

 

干細胞分離液    
LGS1073TBD人骨髓間充質(zhì)干細胞分離液200ml400
LGS1068TBD人外周血造血干細胞分離液200ml400
LGS1072TBD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分離液200ml400
LGS1072WTBD大鼠外周血造血干細胞分離液200ml400
LGS1081TBD小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分離液200ml400
LGS1081WTBD小鼠外周血造血干細胞分離液200ml400
LGS1090TBD兔骨髓間充質(zhì)干細胞分離液200ml400
LGS1090WTBD兔外周血造血干細胞分離液200ml400
LGS1072ZTBD狗骨髓間充質(zhì)干細胞分離液200ml400
LGS1072GWTBD狗外周血造血干細胞分離液200ml400
LGS1082TBD牛骨髓間充質(zhì)干細胞分離液200ml400
LGS1082WTBD牛外周血造血干細胞分離液200ml400
LGS1080TBD豚鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分離液200ml400
LGS1080WTBD豚鼠外周血造血干細胞分離液200ml400
LGS1086CTBD雞骨髓間充質(zhì)干細胞分離液100ml400
LGS1086CWTBD雞外周血造血干細胞分離液100ml400
LGS1074TBD猴骨髓間充質(zhì)干細胞分離液200ml400
LGS1074WTBD猴外周血造血干細胞分離液200ml400
LGS1106TBD豬骨髓間充質(zhì)干細胞分離液100ml400
LGS1106WTBD豬外周血造血干細胞分離液100ml400
LGS1090HTBD馬骨髓間充質(zhì)干細胞分離液100ml400
LGS1090HWTBD馬外周血造血干細胞分離液100ml400
LGS1083TBD羊骨髓間充質(zhì)干細胞分離液100ml400


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