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實時熒光定量PCR實驗服務

實時熒光定量PCR實驗服務

產品型號:

所屬分類:分子生物學實驗

產品時間:2024-08-30

簡要描述:實時熒光定量PCR實驗服務
[平臺項目開展范圍]慢病毒,腺病毒,RNAI類, 分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動物實驗,蛋白組學實驗,芯片類實驗,并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI. 核心期刊等服務。

詳細說明:

實時熒光定量PCR實驗服務


提供快捷高效的實時熒光定量PCR(Real TIme PCR,RT PCR)服務,所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。是一個常用的mRNA水平的基因表達定量技術。


服務內容

細胞組織的基因差異表達檢測,經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、 化學處理等),特定基因在不同時段的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的確證。

組織/細胞樣品中基因拷貝數的確定,DNA或RNA的相對和定量分析。包括病原微生物或病毒含量的檢測,轉基因動植物轉基因拷貝數的檢測,RNAI基因失活率的檢測等?;蚍中?,基因突變及多態(tài)性方面的研究。


技術原理

Real-time PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴 增產物量的變化,通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析。實時熒光定量PCR技術具有特異性強,有效解決了PCR污染問題、自動化程度高等特點,做到PCR每循環(huán)一次就收集一個數據,建立實時擴增曲線,準確地確定Ct值,從而根據Ct值確定起始DNA拷貝數。做到了真正意義上的DNA定量。


技術流程

一、RNA的提取

二、DNase I消化樣品RNA中的DNA

三、RNA瓊脂糖凝膠電泳

四、RNA反轉錄為cDNA

Real-Time PCR弓物設計的要求

①Tm=55~65 °C

②GC=30~80%

③PCR擴增產物長度:引物的產物大小不要太大,一般在80~300 bp之間都可。

④引物的退火溫度要高,-般要在60 °C以上。


五、cDNA與引物質量檢測

選擇特異性好。擴增效率高的引物作為實時熒光使用引物。


六利用相對定量的方法分析目的基因表達量的情況:

常用的看家基因有B-actin, GAPDH, 188 rRNA


七、定量PCR檢測


八擴增曲線和溶解曲線

溶解曲線全部為單峰表明為特異性擴增,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。


收費標準/服務周期/提供結果:

歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。

更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!


實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取


蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗


免疫共沉淀

真核表達載體構建

染色質免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗




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